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細胞毒性/增殖

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項目介紹

細胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種,檢測藥物或者新型材料在生物環境中的毒性情況,即通過檢測材料或者藥物對細胞的增殖或者生長的影響,來評價藥物或材料的毒性或者活性,主要用于藥物活性篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、抗腫瘤藥效測定等;常用MTT法或者CCK-8法檢測。

操作流程:

(1)收集對數期細胞,調整細胞懸液濃度3x104  ~5x104 個/mL;

(2)96孔加入細胞懸液,100ul/孔,邊緣用pbs填充,5%CO2 、37℃孵育;

(3)培養24h后給藥,設置3~6個復孔,5%CO2 、37℃孵育;

(4)孵育適當時間后,棄舊液,用無血清培養基與CCK8按照10:1稀釋200ul/孔/無血清培養基與MTT按照9:1稀釋,200ul/孔,繼續培養至所需時間點;

(5)CCK8: 時間到后,酶標儀450nm/處測量各孔的吸光值。

客戶提供:

(1)足量樣品、樣品信息(如細胞類型、分子量、溶解性、穩定性、保存條件等);
(2)相關實驗設計內容(如樣品作用時間、濃度等、細胞株等)。

樣品要求

1.待測樣品(濃度用戶指定)、實驗方案、相關細胞、試劑盒及生物耗材等,平臺可有償提供。

項目案例

常見問題
1、MTT法檢測細胞活性原理

在活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍紫色甲臢化合物,用二甲基亞砜(DMSO)將其溶解成溶液,用酶標儀測定其濃度(OD490或者570),從而定量測定細胞的存活比例,細胞增殖越多越快,對應的吸光度越高;細胞毒性越大,對應的吸光度越低。

2、CCK8法檢測細胞活性原理

CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內的脫氫酶驗明正身。在脫氫酶作用下,WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產物,用酶聯免疫檢測儀在OD 450nm波長處測定其光吸收值。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

3、相較于MTT法,CCK8試劑盒的優點有哪些?

1.使用方便,省去了洗滌細胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;

2.CCK-8法能快速檢測;

3.CCK-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細胞密度;

4.CCK-8法的重復性優于MTT 法;

5. CCK8適用于貼壁細胞和懸浮細胞;如樣品容易沉淀或殘留且易溶于DMSO,建議選用CCK8法檢測。

細胞毒性/增殖

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7天無理由免費復測
1. 復測保證

如果在訂單完成之后7天內對結果存疑,可申請同條件免費復測,更換條件或者參數不能參與免費復測保障服務,全程由專業團隊操作,確保結果有效性;

2. 具體細則

每單限1次復測機會,單次需小于5個樣品; 此外免費復測樣品必須為同一樣,私人定制、云視頻測試不可享受此服務;

3. 注意事項

如果由于您自身樣品的情況(樣品有問題/選錯測試條件等)將不可享受此服務;

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