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HE染色實驗原理與步驟講解
來源: 時間:2022-12-30 09:32:04 瀏覽:28787次

一、原理

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ),簡稱HE染色。HE染色是組織學、病理學教學與科研中最基礎、使用最廣泛的技術方法之一。

蘇木精染液為堿性,可以將組織的嗜堿性結構(如核糖體、細胞核及細胞質中的核糖核酸等)染成藍紫色;伊紅為酸性染料,可以將組織的嗜酸性結構(如細胞內及細胞間的蛋白質,包括路易體、酒精小體以及細胞質的大部分)染成粉紅色,使整個細胞組織的形態清晰可見。組織切片方法是教學、科研、病理檢驗工作中非常常用的一種試驗方法,HE染色則是在制作切片的過程中最常用的染色方法。

二、實驗標本

石蠟切片、冰凍切片

三、實驗試劑材料

多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蠟、蘇木精水溶液、酒精伊紅染色液、生理鹽水、蒸餾水、PBS等實驗必備溶劑

四、實驗步驟

(1)樣本組織固定與切片:首先將組織樣本進行常規的石蠟包埋。在模具中加入液態石蠟,將待包埋的組織樣本放入石蠟中,確保組織位置規整。補充少許液態的石蠟后,進行降溫冷凍,使石蠟變為固態達到組織固定的效果,然后使用石蠟切片機進行切片,厚度在4-8um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

(2)組織樣本脫蠟:將待測組織樣本切片放于二甲苯中,充分浸泡10min,浸泡完后更換二甲苯繼續浸泡10min,目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解,這樣可以在進行染液染色的時候,染液可以充分進入組織種,同時,二甲苯還可以起到透明的作用,使切片更容易觀察。

(3)組織樣本水化:將浸泡過二甲苯的待測組織樣本先放入無水乙醇中浸泡5min,使脫蠟時用的二甲苯可以被洗脫出去,使水可以進入組織中;再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5min以達到充分水化的效果。

(4)組織切片蘇木素染色、分化與反藍:將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,每次浸泡5min,總共清洗3次。之后用移液槍吸取已經預先配制好的蘇木素染色液,每個組織切片滴加100ul,充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進行分化,使細胞核中結合過多的染液和細胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后,再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍色,使用弱堿性的促藍液加入組織切片中,讓細胞核染藍色。反藍結束后先用清水進行清洗,再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

(5)組織切片伊紅染色與脫水:向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液,并使組織可以充分染色3min,染色完畢后,再將組織切片進行梯度脫水,分別使用濃度為80%、95%以及無水乙醇進行操作。80%的乙醇脫水5s,95%乙醇脫水2min,無水乙醇脫水2min。

(6)組織樣本切片風干封片:將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡2次,每次持續4min,然后將組織樣本切片干,并使用中性樹膠封片。

(7)最后在顯微鏡下觀察并拍照

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12條評論
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全部 3小時前 四川
文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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